Переваги аналізу pNPP включають широкий лінійний діапазон реакцій, як концентрація субстрату (pNPP) не є граничною. Крім того, pNPP недорогий.

Обмеження PNPP такі це невелика молекула і, можливо, не повністю представляє умови та структури, які зустрічаються фізіологічно.

pNPP (п-нітрофенілфосфат) – це a хромогенний субстрат для лужної фосфатази (ЛФ). У присутності AP pNPP швидко гідролізується до п-нітрофенолу та неорганічного фосфату. Вивільнений п-нітрофенол видно як прозорий жовтий колір, який вимірюється при 405/620 нм.

Наприклад, тип субстрату, який використовується проти ферменту HRP, включає субстрат OPD, ABTS і TMB, тоді як субстрати лужної фосфатази включають pNPP, BCIP і NBT. Субстрати допомога у візуалізації та вимірюванні кольору або сигналу, що генерується під час реакції ELISA.

Аналіз можна використовувати для швидкий аналіз активності протеїн-фосфатази в будь-яких нестандартних умовах.

Як Pi, так і pNP показують залежне від концентрації інгібування каталізованого кальциневрином гідролізу pNPP, як показано на рис. 1, A і B. Як видно, інгібування Pi відбувається при значно нижчих концентраціях, ніж для pNP. Про це свідчить кінетичне дослідження обидва продукти є конкурентними інгібіторами (див. графіки Лайн-Вівера-Берка на рис.

Розчинити pNPP або в 0,1 М гліциновому буфері, що містить 1 мМ MgCl2, 1 мМ ZnCl2, рН 10,4, або 1 М буфері діетаноламіну, що містить 0,5 мМ MgCl2, рН 9,8, до потрібної концентрації (зазвичай використовується концентрація pNPP 1 мг/мл).